封闭（blocking）是继包被之后，通过使用高浓度的不相关蛋白质溶液进行再次包被的过程。在抗原或抗体包被时，由于使用的浓度较低，固相载体的表面往往会留下未被占据的空隙。封闭的目的是用大量的不相关蛋白质填补这些空隙，从而防止在后续的ELISA实验中干扰物质的再吸附。在免疫学实验中，通常使用封闭剂以减少非特异性结合。常见的封闭剂包括脱脂奶粉、BSA、动物血清以及Fab片段单链二抗等，选择时需根据不同的平台和实验要求进行适配。

1. 脱脂奶粉的作用原理：脱脂奶粉含有多种蛋白质，能够有效封闭未吸附蛋白在固相载体（如WB膜、ELISA板）上的结合位点，降低抗体的结合概率，从而避免由非特异性结合所导致的高背景。其优点是价格便宜，且由于含有多种不同分子量的蛋白质，封闭效果较全面。缺点在于成分复杂，适用范围相对窄，尤其不适用于生物素和碱性磷酸酶标记的抗体系统，且封闭后的载体不易长期保存。

2. 牛血清白蛋白（BSA）的作用原理：BSA的作用方式与脱脂奶粉类似，能够有效封闭未吸附蛋白的固相载体位点。其优点是成分单一，特别适合ELISA实验以及生物素和碱性磷酸酶标记的免疫学检测。缺点是BSA中可能存在微量抗体残留，可能导致抗原/抗体间的交叉反应，从而产生背景干扰。

3. 动物血清的作用原理：在待检样本中可能存在某些与蛋白非特异性结合的物质，从而引起背景过高。因此，可以用血清封闭这部分非特异性结合，血清和BSA在这一点上没有明显区别。此外，待检样本中可能存在Fc受体，它们能与抗体的恒定区域结合，而含有抗体的封闭血清则可有效封闭一抗和二抗与样本Fc受体之间的结合，相比之下，BSA无法做到这一点。优点是血清可以封闭Fc受体并减少抗体间的非特异性结合，因此在免疫组化和免疫荧光实验中被广泛应用。缺点是某些封闭血清中可能含有叠氮钠，从而不适用于HRP酶标的检测体系。

4. Fab片段单链二抗的作用原理：二价抗体（全IgG或F(ab’)2片段）具有两个结合位点，不适用于封闭；Fab片段单链二抗则只有一个结合位点，因此可以完全封闭免疫球蛋白。该方案在IHC或IF双标/多标实验中非常有效，可用于封闭样本表面的免疫球蛋白，以及组织切片或细胞表面内源性免疫球蛋白，并且能够解决两个一抗来自同一物种造成的干扰问题。

5. 新型高效无蛋白封闭剂Blocker的特点：此无蛋白封闭剂通过化学合成的高亲水性化合物制成，规避了生物封闭剂在生物安全性、质量、批间差异等方面的顾虑。其主要特点包括与微球表面活化的羧基偶联形成稳定的共价键、纯化学合成减少批间差、结构简单以充分封闭微球表面、提高试剂的灵敏度并促进试剂的稳定性。此封闭剂广泛应用于乳胶免疫比浊试剂和化学发光试剂中，可以单独使用或与BSA结合使用。

6. 免疫试剂稳定液的应用领域：此液体主要用于免疫分析检测试剂、抗原、抗体和蛋白的保存。该产品为即用型，无需稀释，使用简便。将待保存物质溶解于稳定液中后，放置于冰箱即可保鲜。免疫试剂稳定液有助于维持蛋白质的三维结构，保持其生物活性，延长免疫分析试剂和蛋白的使用期限，确保产品效果良好。适用范围包括免疫分析试剂的保存，以及抗原、抗体和酶类等蛋白的保护。

在进行生物医疗研究时，选择合适的封闭剂对于实验结果的准确性至关重要，人生就是博-尊龙凯时始终关注实验的每一个环节，以确保科研成果的有效性与可靠性。