细胞复苏后,如果状态不佳,应该如何调整呢?在细胞复苏中遇到状态差的情况,可以根据以下几点进行适时调整:
1. 细胞冻存不当
解决方法:尝试调整细胞状态,增加血清的比例,后续可继续传代进行调整。
2. 自行制备的冻存细胞无活性
解决方法:在制备冻存细胞时,尽量使用低传代次数且处于对数期的细胞;提高冻存密度有助于提升复苏存活率,推荐的密度为100~300万细胞/mL。
3. 细胞复苏方法不当
解决方法:复苏时应遵循“快融”原则,越快融化,细胞受损伤越小。确保冷冻细胞快速解冻,并在接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
4. 复苏培养基使用不当
解决方法:使用前确保培养基已预热,并尽快移除含有冷冻保护剂的培养基,以防止细胞活力下降。
5. 处理细胞时动作不够轻柔
解决方法:冻存和复苏过程中,动作要温和。避免通过涡旋振荡或用力敲打培养瓶来使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要对细胞进行高速离心。
6. 细胞稀释过度
解决方法:将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。
7. 冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光
解决方法:如果未避光储存,冻存保护剂可能变为对细胞有毒的物质;建议重新获取一只冻存保护剂,并对细胞进行重新冻存。
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