人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% P

传代方法：首次建议进行1:2的传代，2天后更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基，为过渡培养做准备。如果对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完整培养基。

二、细胞处理方法

细胞收到后，待培养至良好状态后，应该灌满完整培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。接收细胞时应用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行严格的无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并进行不同倍数拍照保存（最好于40x、100x、200x各拍一张），前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片则默认收到状态良好。

在传代后，建议一瓶用原瓶的完整培养基，另一瓶用自配的完整培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖稍微拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，将瓶装的培养液收集至离心管中，留5ml完整培养基，在37℃、5% CO2的孵箱中培养；如果细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲培养瓶后加5ml完整培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液后补加1-2ml完整培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完整培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，稍微倾斜观察，当细胞回缩变圆后迅速加入5ml完整培养液终止消化，然后轻轻吹打细胞使之脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。

4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如果需要转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁；

2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完整培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，沉淀后用5ml完整培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；

4. 第二天更换为新鲜完整培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞的贴壁能力较弱，运输过程中可能会脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可以将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。沉淀后，加入1-2ml胰酶，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后加入5ml完整培养基终止反应。再离心，弃去上清，加入1-2ml完整培养基重悬。最终按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完整培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

人生就是博-尊龙凯时为您提供高品质的细胞产品。如果细胞出现问题，我们的重发政策如下：

1. 运输过程中遇到的各种问题，包括细胞丢失、瓶身破损和培养液泄漏，均可重发。
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，提供真实的实验结果以便核实，如确认污染，适用重发。
3. 对于常温发货的细胞，静置24小时及干冰冻存发货的细胞在复苏后24小时如果大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可进行重发。
4. 若收到的细胞在复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时出现污染，亦可重发。
5. 关于细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法评估细胞活力，核实后可重发。
6. 在收到细胞当天及接下来的第二、三天内请拍照以便售后服务，3天未告知的将视为产品合格，如果在4-7天内出现问题需要提供前三天的照片和详细操作步骤，由技术人员判断责任并进行重发。

我们始终致力于为您提供优质的细胞产品及服务，人生就是博-尊龙凯时期待您的光临。