小鼠肺微血管内皮细胞形成了一种半选择性屏障，这种屏障在肺部的气体交换、液体与可溶物在血液与肺间质之间的调节中起着至关重要的作用。此外，它们还具有代谢功能，能够承担一定的非呼吸相关功能。在肺部损伤的情况下，肺微血管内皮细胞是活性氧物质的重要靶细胞之一。在肺炎的发生过程中，神经体液介质和氧化剂影响内皮细胞，导致细胞间隙的渗透性增加，促使蛋白质从血液中渗入间质。细胞间隙渗透性的提升会造成低氧血症，并最终引发成人呼吸窘迫综合症及非心源性肺水肿。

小鼠肺微血管内皮细胞来源于实验动物的正常肺组织，这些细胞呈上皮样、多角形，能够贴壁培养，并通过CD31免疫荧光染色进行鉴定，细胞纯度高于90%，且不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等污染物。

实验所需仪器设备及试剂

1. 仪器

仪器名称:

• 生物安全柜 BSC-1500ⅡA2-X
• CO2细胞培养箱 BC-J160S
• 荧光倒置显微镜 DS-Ri2
• 高速冷冻离心机 Multifuge X1R
• 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9123A
• 电热恒温震荡水槽 DK-2B

2. 试剂耗材

试剂名称及规格:

• T25细胞培养瓶 430639
• 血球计数板 Neubauer improved
• 24孔板专用细胞爬片 YA0350
• 细胞培养孔板 WHB-24
• 胎牛血清 1414426
• 内皮细胞培养基 Primed-icell-0020
• 2.5%胰蛋白酶（含0.02% EDTA） 1734858

小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养方法

1) 将5-10天龄的乳鼠浸泡在75%乙醇中，然后移入生物安全柜。

2) 解剖乳鼠并取出双肺，尽可能去除连结组织，然后将肺放入预冷的PBS中。

3) 取肺的边缘部分，剪碎后将组织块转移至T25培养瓶中，倒置放入细胞培养箱。

4) 经过2小时后，向培养瓶中注入2 mL内皮培养基，注意将瓶子正置，以防止组织块漂浮。

5) 每3天更换2 mL培养基，待细胞从组织块中迁移出来后，改为每2天换液，待细胞融合度达到60-70%时，去除组织块，并将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。

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