人生就是博-尊龙凯时的HL60细胞培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人早幼粒白血病细胞HL60
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：IMDM + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议按照1:2的比例进行传代。换液频率为2天一次。
备注：使用无菌离心管收集培养基，并留作对比培养。如果对比培养效果不理想，建议直接采购我们提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在收到细胞时，请使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后将其放置于超净台内以确保无菌操作。细胞瓶需置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。请使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议分别拍摄40x、100x、200x的图片）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如果未提供照片，则默认为细胞状态良好。（传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请松开瓶盖。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如细胞未超过80%汇合度，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2的孵箱进行培养；如细胞密度超80%，即可进行以下传代步骤：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS对细胞进行1-2次洗涤。
2. 添加约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗一次细胞。
2. 添加约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，添加5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱即可。如需将细胞转入液氮罐中，应在-80℃冰箱中存放24小时以上，后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶为止，随后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，加入5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会因贴壁不牢而发生脱落，这是正常现象。如脱离较多，可将所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养（后期进行对比培养），沉淀后加入1-2ml胰酶轻轻吹打后重悬，并消化1-2分钟，随后添加5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，然后按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1) 细胞出现问题时的重发情况：
- 运输途中遭遇的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液，均可申请重发；
- 收到产品48小时内如有细胞污染问题，请提供真实实验结果，经核实后可重发；
- 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，若绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
- 若干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时且未开封后发现污染，可申请重发；
- 细胞活性问题需在收到产品7天内给出真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可重发；
- 收到细胞当天及第2、3天请拍照，若3天未告知则视为产品合格。4-7天内如出现问题，请提供前3天的照片及详细操作步骤，与技术人员沟通后，由技术人员判断责任。对我方负责的可重发，若双方均有责任则协商处理或按合同价的50%收费重发。

2) 细胞出现问题的不予重发情况：
- 客户造成的细胞污染，不予重发；
- 客户因操作不当导致细胞状态不良，不予重发；
- 采用非本库推荐的细胞培养体系而导致细胞状态不良，不予重发；
- 未提供细胞培养前3天的照片，细胞状态不良，不予重发；
- 细胞在培养时经历其他处理，不予重发；
- 收到细胞2天内未告知，不予重发；
- 具体情况将由我们予以判断，最终修订。人生就是博-尊龙凯时，期待为您提供更好的服务。