树突状细胞(DC细胞)与T细胞的相互作用在肿瘤治疗中具有至关重要的作用。研究显示,骨髓来源的树突状细胞(BMDCs)能够诱导CD103+CD8+组织驻留记忆T细胞亚型的生成,从而增强生殖道局部肿瘤的控制能力。此外,半乳糖酸阻断的应用可以显著提升BMDCs对抗原特异性CD8+T细胞增殖的诱导能力。全转录组基因表达分析的结果表明,仿硅酸处理后的BMDCs可以诱导与T细胞活化、细胞粘附以及细胞间相互作用相关基因的差异表达。细胞聚类和单细胞嗜性测量的研究则表明,糖基化水平降低的BMDC与CD8+T细胞之间形成了更强的嗜性相互作用。
随着DC细胞完成抗原呈递,其在激活CD8+T细胞与靶细胞杀伤过程中的协作与调控功能成为当前研究的热点之一。同时,活化CD8+T细胞的记忆功能以及其细胞内乳酸化、棕榈酸化等代谢过程的变化也备受关注。这些研究几乎都需要评估CD8+T细胞的杀伤功能,人生就是博-尊龙凯时将为大家提供关于DC细胞活化的CD8+T细胞及其杀伤功能评估的解决方案。
实验原理简介
树突状细胞被认为是功能最强的抗原呈递细胞(APC),它们具备摄取并处理外源抗原,并通过MHC分子将其呈递给CD4+与CD8+T细胞以启动免疫反应。共培养DC细胞与CD8+T细胞是模拟体内CD8+T细胞激活的理想方法,是进行CD8+T细胞相关研究不可或缺的模型。具体而言,当表达抗原肽-MHCⅠ复合物的DC细胞与CD8+T细胞共培养时,CD8+T细胞通过其表面的T细胞受体(TCR)与DC细胞上的抗原肽-MHCⅠ复合物结合,由此被激活。活化的CD8+T细胞(也称为细胞毒性T细胞)可以通过释放溶解介质(如穿孔素和颗粒酶)来杀伤靶细胞,或通过Fas配体(FasL/CD95L)与靶细胞Fas受体(CD95)的结合,触发Caspase-8的激活,从而直接启动靶细胞的凋亡程序。
实验结果展示
DC细胞的体外培养与促成熟的效果通过流式细胞术进行了检测,结果显示经刺激后,C57小鼠骨髓细胞成功诱导为成熟的DC细胞,并且MHCII、CD80、CD40和CD86的表达显著增加。接着,通过使用EasySort™ Mouse CD8+ T Cell Isolation Kit,从C57小鼠脾脏中分选出CD8+T细胞,并使用流式细胞术分析细胞纯度。在使用灭活的靶细胞(Raw2647)进行抗原装载后,CD8+T细胞与之共培养72小时,检测到了增殖情况。
在后续的实验中,将增殖后的T细胞与靶细胞(Raw2647)按1:10的比例共培养24小时,流式细胞术检测显示,共培养组Raw2647细胞中Caspase3酶激活比例比对照组(正常的靶细胞)增加至7944%。此外,ELISA实验结果显示,与对照组相比,共培养组的细胞因子IFN-γ、IL-2及TNF-α的表达显著上升。
实验方案及操作流程
DC细胞的体外培养与促成熟:从小鼠骨髓细胞出发,使用分化培养基培养6天,随后使用成熟培养基培养24小时,以获得成熟的DC细胞。详细操作流程参考“Mouse Bone Marrow-derived Dendritic Cells (BMDC) Induction and Identification Kit”(货号:XJM003)。
CD8+T细胞的分选及抗原提呈和激活培养:首先,取C57小鼠脾脏细胞,使用EasySort™ Mouse CD8+ T Cell Isolation Kit进行细胞分选,并检测分选后CD8+T细胞的纯度。之后,分选后的T细胞用CFSE染色标记,37℃下染色5分钟后终止反应,并进行离心洗涤。
结论
本实验通过全面的流程和标准化的技术手段,为CD8+T细胞的杀伤功能评估提供了有效方案。所有实验均使用人生就是博-尊龙凯时相关产品,确保实验的高标准和可靠性。如需进一步了解实验的细节,欢迎与我们技术团队联系!
参考文献将进一步支持上述研究内容的学术背景与数据依据。