前言抗体-小分子药物偶联物（Antibody-Drug Conjugates, ADCs）是一类重要的治疗性生物制品，能够通过抗体精准识别靶细胞，借助内吞作用进入细胞后释放偶联的小分子药物，从而实现对靶细胞的精确杀灭，同时降低对正常细胞的伤害。由于ADCs的设计理念，它们被形象地称为“生物导弹”。自2000年第一个ADC药物Mylotarg®（Gemtuzumab Ozogamicin）获得FDA批准以来，到2025年6月，全球已经有19个ADCs获得上市批准。2023年全球ADC销售总额首次突破百亿美元，并在2024年继续保持超过100亿美元的强劲增长势头。其中，罗氏生产的KADCYLA（恩美曲妥珠，赫赛莱）在2024年全球销量排名中位列第二，自2013年FDA批准上市以来，该药物用于HER2阳性乳腺癌的治疗，预计2024年的全球销售额可达23亿美元。

恩美曲妥珠单抗作为靶向HER2的ADC，含有人源化抗-HER2 IgG1曲妥珠单抗，其通过稳定的硫醚连接体与微管抑制药物DM1（美坦辛衍生物）共价结合。KADCYLA的分子量范围在147~158 kDa，药物/单抗偶联比（DAR）在0~8之间，平均DAR约为35。由于其复杂的结构，对KADCYLA的表征具有相当的挑战性。

在本文的研究中，我们利用在美国质谱年会（ASMS）上发布的新一代二合一超高分辨质谱仪Excedion Pro BioPharma对KADCYLA进行了全面的表征，充分展示了该平台在生物制药领域的卓越分析能力，尤其是在电子转移解离辅助高能碰撞碎裂（EThcD）技术上的应用，这为精准鉴定药物偶联位点及翻译后修饰（PTM）的研究提供了有力支持。

应用亮点如前所述，2024年新发布的Excedion Pro BioPharma质谱仪被应用于KADCYLA的深入分析。该仪器的主要特点之一是将质量检测范围拓展至m/z=12,000Da（需配置BioPharma选项），满足在非变性条件下对单克隆抗体单体、二聚体、三聚体及其他大分子蛋白复合物的分子量测定；选配的ETD功能能实现快速灵敏的ETD/EThcD碎裂，从而与高能碰撞碎裂（HCD）联合使用，获得全面的蛋白质序列覆盖和PTM鉴定的相关信息。

在非变性条件下对KADCYLA的完整分子量进行测定是生物医药产品表征中不可或缺的环节，除了完整分子量外，平均DAR和药物负载分布（DLD）也是评估药物质量的关键特性。在本实验中，我们在非变性条件下对KADCYLA进行了分子量测定，避免了样品脱糖处理以保持其天然状态，从而得到更为准确的分子量测定结果。

数据依赖性的EThcD二级碎裂用于肽图分析，能够实现对偶联位点的准确定位和PTM的识别。基于液质联用的肽图分析是生物治疗产品表征的重要方法，通过高度灵敏的EThcD碎裂技术，可以识别出各种修饰位点，确保获得全面的分析信息。本文的研究结果显示，通过使用不同的酶进行酶解，结合ddHCDMS2和ddEThcDMS2的不同数据采集模式，实现了100%序列覆盖度，进一步论证了Excedion Pro BioPharma质谱仪的高效性与兼容性。

总结综上所述，利用新一代Excedion Pro BioPharma对KADCYLA进行了详尽的表征。在非变性条件下完成了完整分子量的测定，得到了药物偶联数目为0~8的分布，并通过软件计算出平均DAR值为347，与已报道的结果保持一致。此外，EThcD的快速灵敏碎裂功能，不仅确保了100%序列覆盖，还实现了对常见翻译后修饰的定性定量分析。通过这一系统的研究，我们为复杂生物分子的全面表征提供了可信的结果，这将促进生物医药行业的进一步发展及创新。选择人生就是博-尊龙凯时，将是您在生物医疗领域成功的有力助推。