TurboTEV蛋白酶是一种改良的半胱氨酸蛋白酶，其催化片段源自烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白。该酶能够特异性地识别并切割位于Gln和Gly之间的Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly序列。TurboTEV蛋白酶在4°C下展现出强大的活性和稳定性，且不依赖于特定的缓冲液，可以在最适合目标蛋白的条件下使用。

TurboTEV蛋白酶为52kDa大小，带有GST和His标签，便于通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂去除融合标签。

以下是TurboTEV蛋白酶的基本信息：

• 来源及活性：该酶源自大肠杆菌，活性超过10 Units/µg。1单位的TurboTEV蛋白酶可在30℃下裂解3µg对照底物的85%。

实验步骤：

1. 准备溶液：
   • A. 制备新鲜的冰冷透析缓冲液，其示例配方为：25mM Tris-HCl，pH 8.0，150-500mM NaCl，14mM β-巯基乙醇。
   • B. 稀释目标蛋白样品：使用透析缓冲液将目标蛋白稀释至1-2 mg/mL。如果目标蛋白发生聚集，可以选择跳过此步骤。
   • C. 按照1:100（w/w）的比例加入TurboTEV蛋白酶，100mg目标蛋白对应于10000 Units（1mg）的TurboTEV蛋白酶。
   • D. 在4°C下用透析缓冲液透析过夜（约16小时）。
2. 去除TurboTEV蛋白酶：使用适当的分离技术去除酶。
3. SDS-PAGE分析：可选择进行此步骤以确认蛋白质的切割情况。

产品应用：

• 蛋白裂解功能
• 去除重组蛋白中的融合标签
• 进行蛋白质和肽的纯化

常见问题解答：

Q1：TEV消化反应的缓冲条件是否重要？会对TurboTEV的剪切效率产生不良影响吗？

A：1mM DTT对效果影响不大，但不推荐使用10%的甘油、20mM组氨酸、500mM NaCl及100mM Tris-HCl。β-巯基乙醇可与DTT互换使用。

Q2：剪切之前是否需要交换蛋白质的缓冲液？

A：根据实验需要，进行缓冲液交换可能是必要的。

参考文献（部分）： [1] Hyeok-Jin Ko et al. 关于功能性细胞表面展示及控制分泌多种淀粉酶的研究。
[2] Jussi J. Joensuu et al. 在尼古丁烟草中通过水合蛋白融合实现高水平的瞬时蛋白表达与纯化。

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